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实验研究红花水提物论文对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所致的心肌微血管内皮细胞损伤的影响

发布日期:5个月前 (2019-06-10) / 所属分类:论文网

摘 要:观察红花水提物对血管内皮细胞的保护作用,探求其抗氧化的机制。方法:利用大鼠原代心肌微血管内皮细胞(rcmec)的培养进行试验,并对获得的数据进行方差分析(anova)及多组间比较等。结果:提示呈现红花水提物具有提高抗氧化酶活性、减少氧化产物生成及减轻ox-ldl损伤作用的趋势。结论:通过红花水提物预处理,可以减轻ox-ldl对内皮细胞的氧化损伤。

关键词:红花水提物;心肌微血管内皮细胞;氧化低密度脂蛋白 
  中药在治疗心血管疾病方面具有明显的功效,本文就红花水提物对氧化低密度脂蛋白(ox-ldl)所致的心肌微血管内皮细胞损伤的影响机制做一探讨。
  1 资料与方法
  1.1  实验药物
  1.1.1 红花水提物过程:取新疆红花200 g,加水2 500 ml,加热到沸腾,然后提取1.0 h,并进行过滤,最后把滤液浓缩到每毫升相当于3.338 g生药[1]。
  1.2  实验动物:出生5~7d的wistar大鼠乳鼠。
  1.3  实验试剂:噻唑蓝(mtt,sigma,sp 1 080)、氧化低密度脂蛋白(ox-ldl)、超氧化物歧化酶(sod)、二甲基亚砜(dmso)、丙二醛(mda)、一氧化氮合酶(nos)、乳酸脱氢酶(ldh)、谷胱甘肽过氧化物酶(gsh-px)、一氧化氮(no)和黄嘌呤氧化酶(xod)测定试剂盒。
  1.4  实验仪器:超净工作台,mco-15 ac型co2培养箱,mk型倒置显微镜,h2s-h型恒温水浴振荡器,ldz 4-0.8型离心机,550型酶联免疫检测仪。实验研究红花水提物论文
  1.5  红花水提物对ox-ldl所致心肌微血管内皮细胞损伤的影响的实验方法
  1.5.1 培养大鼠原代心肌微血管内皮细胞(rcmec):首先进行rcmec原代培养,经鉴定为rcmec后,再传代培养,把第3代rcmec用于实验[2]。
  1.5.2 实验分组:以1.5×105个/ml的密度把内皮细胞接种于96孔板,每孔0.1 ml,24 h细胞贴壁后,分组:①空白对照组:每孔加入无血清培养基100 μl;②模型对照组:每孔加入剂量为100 μg·ml-1的ox-ldl的无血清培养基100 μl作用24 h;③红花水提物500 μg·ml-1组,100 μg·ml-1,20 μg·ml-1组;造模前24 h分别加入不同浓度的红花水提物100 μl,然后加入含ox-ldl的无血清培养基100 μl作用24 h[3]。
  1.6  形态学观察
  1.7  指标检测及计算:通过mtt法检测,测出活细实验研究红花水提物论文胞的量与吸光度(a值)成正比,故用a值表示细胞存活率,抑制率=[1-(实验孔a值-空白孔a值)/(对照孔a值-空白孔a值)]×100%。在酶联免疫检测仪上进行mtt的检测[4]。
  1.8  数据分析:以均值±标准差形式来表示结果,采用方差分析(anova)进行多组间比较,以p﹤0.05为差异有统计学意义。

  2 结果
  2.1  形态学观察:在倒置显微镜下观察发现:正常对照组与大、中剂量组细胞呈现相似形态,无显著性变化;模型组细胞出现皱缩,呈现空泡。模型组大部分细胞在mtt染色后不着色,少数细胞出现紫色结晶物,其数量随着各个给药组红花水提物浓度的增加而增多。
  2.2  对内皮细胞存活率的影响:红花水提物500 μg?ml-1,100 μg?ml-1,20 μg?ml-1均能明显抑制ox-ldl引起的内皮细胞损伤,使细胞存活率明显提高
  2.3  不同浓度的红花水提物均具有很好的抑制作用,对ox-ldl所致的微血管内皮细胞的no,sod,gsh-px和 nos含量降低,还可以减少细胞上清液中ldh,xod和mda的含量。
  3 讨论
  实验发现,生物体内低密度的氧化修饰呈现一个自由基的链式反应过程。利用红花水提物来提高受ox-ldl损伤后内皮细胞的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性,以减轻氧化损伤。通过红花水提物的预处理能有效减轻ox-ldl对内皮细胞的氧化损伤,抑制丙二醛(mda)和乳酸脱氢酶(ldh)的生成,提高no,sod,gsh-px和nos的活性,保护内皮细胞,抑制其氧化损伤。
参考文献:
[1] 陈少刚,李长潮.当归注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用[j].中国中西医结合杂志,1995,10(1):142.
[2] 何煜舟,丁美萍.大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用[j].浙江中医杂志,2006,13(2):334.
[3] 田晓华,丛建波,施定基,等.褐藻硫酸多糖清除活性氧自由基作用及动力学的esr研究[j].营养学报,1997,23(4):274.
[4] 伍  静,姚尚龙,杨  艳,等. 异丙酚对鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用[j].中华麻醉学杂志,2002,17(9):312.
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